Autoklav steriliseringseffektverifisering

Et av de essensielle laboratorieinstrumentene i et mikrobiologilaboratorium er sterilisatoren, med autoklaver som den mest brukte typen. I følge GB 4789.1-2016, bør laboratorieutstyr regelmessig inspiseres og/eller kalibreres (med passende merking), vedlikeholdes og betjenes for å sikre operasjonell ytelse og sikkerhet. Men gjennomgår sterilisatoren din lignende inspeksjoner? Hvis slik validering er nødvendig, hvordan skal den gjennomføres?

I dag vil vi oppsummere de viktigste aspektene ved validering av steriliseringseffektivitet for autoklaver.

De vanlige metodene for validering av autoklav steriliseringseffektivitet inkluderer den kjemiske indikatormetoden, den faste punkttermometermetoden, den selvproduserte temperatursondemetoden og den biologiske indikatormetoden. Prinsippene bak disse metodene er like, og fokuserer først og fremst på å verifisere om temperaturen inne i sterilisatoren når det nødvendige nivået under sterilisering. Avhengig av de spesifikke forholdene i laboratoriet, kan en eller flere metoder velges for validering.

1. Kjemisk indikatormetode
Prinsipp: Kjemiske indikatorer gjennomgår fargeendring eller deformasjon når de blir utsatt for en spesifikk temperatur og varighet, noe som tillater vurdering av om steriliseringsparametere er oppfylt.

En ofte brukt indikator i laboratorier er 3M autoklavindikatorbånd, som endrer farge før og etter sterilisering for å indikere effektivitet. Dette båndet er laget med varmefølsomme kjemikalier og fargevektsmidler trykt i striper på et spesielt limbånd. Båndet skal brukes på utsiden av pakken, med en minimumslengde på 5 cm, og trykket godt for bedre vedheft og forsegling. Etter sterilisering ved 121 ° C i 20 minutter eller 130 ° C i 4 minutter, vil de diagonale hvite stripene på båndet bli helt svart. Hvis fargeendringen er ujevn eller ufullstendig, kan det hende at pakken ikke har oppfylt steriliseringsforhold.

2.
Prinsipp: Denne metoden bruker et kvikksølvtermometer som beholder den høyeste temperaturen nådd, lik et tradisjonelt klinisk termometer. Det hjelper med å bestemme den maksimale temperaturen oppnådd inne i autoklaven under sterilisering.

For validering plasseres et kvikksølvtermometer i en stor konisk kolbe fylt med vann. Under sterilisering er kolben plassert både på de øvre og nedre delene av autoklaven. Etter sterilisering kontrolleres termometeravlesningen mot den nødvendige temperaturen. Imidlertid bekrefter denne metoden bare temperaturen og bekrefter ikke om steriliseringsvarigheten var tilstrekkelig, noe som gjør den til den mest grunnleggende standarden for autoklavvalidering.

3. Selvlaget temperatursondemetode
Prinsipp: Denne metoden utnytter smelte- og omkrystalliseringsegenskapene til visse kjemikalier når de blir utsatt for varme. Ved å forsegle disse kjemikaliene inne i små glassrør og plassere dem i autoklaven, kan krystallformasjonen etter sterilisering indikere om den nødvendige temperaturen var nådd.

Et ofte brukt reagens er benzosyre, som har et smeltepunkt på 121–123 ° C, og samsvarer nøye med den nødvendige steriliseringstemperaturen. Under sterilisering forsegles fast benzosyre i et lite glassrør og plasseres inne i autoklaven. Etter prosessen blir krystallstrukturen til benzosyren undersøkt for å avgjøre om den nødvendige temperaturen ble oppnådd.

I likhet med fastpunkttermometermetoden, indikerer denne tilnærmingen bare temperatur og kan ikke bekrefte om steriliseringsvarigheten var tilstrekkelig.

4. Biologisk indikatormetode
Prinsipp: Denne metoden bruker ikke-patogene Geobacillus Stearothermophilus sporer som indikatororganismer for å vurdere effektiviteten av varmesterilisering. Disse sporer er svært motstandsdyktige mot varme og har en termisk motstand som ligner på Clostridium botulinumsporer, noe som gjør dem til en pålitelig referanse for å evaluere om autoklaven oppfyller steriliseringskrav.

Biologiske indikatorer kommer i tre former:

Spore suspensjoner
Spore strips
Sporestrimler kombinert med et kulturmedium (biologisk indikatorrør)
De biologiske indikatorene er vanligvis plassert på fem steder inne i steriliseringskammeret:

Nedre nivå: Front, midt og rygg
Øvre nivå: Senter
Etter sterilisering inokuleres indikatorene i Bromocresol lilla-glukose peptonvann og inkubert ved 55–60 ° C i 2–7 dager:

Hvis kulturmediet forblir klart og uendret i fargen, er sporer drept, noe som indikerer effektiv sterilisering.
Hvis mediet blir gult og grumsete, har sporer overlevd, noe som betyr at steriliseringsprosessen var ineffektiv.
Den samme valideringsmetoden gjelder både sporoppheng og sporstrimler.

Mange laboratorier bruker også kommersielle biologiske indikatorrør, som fungerer på samme måte som sporoppheng og strimler. Disse rørene inneholder G. stearothermophilus sporer sammen med et glass ampull av kulturmedium. Etter autoklavering knuses glassets ampull inne i røret for å frigjøre kulturmediet, og røret blir inkubert ved 56 ° C, med en positiv kontroll inkludert.

Hvis sterilisering var ineffektiv, vil levedyktige sporer vokse, og vri buljongen gul.
Hvis sterilisering var vellykket, blir sporer inaktivert, og buljongen forblir lilla.
Hyppighet av autoklavvalidering
For øyeblikket er det ingen strenge forskriftsstandarder som definerer hvor ofte autoklaver må valideres. Imidlertid bør laboratorier etablere sin egen valideringsplan og strengt følge den.

For enkel drift og pålitelig validering, anbefales kjemisk indikatorbånd og biologiske indikatorrør. Disse metodene er brukervennlige og gir en omfattende vurdering av steriliseringseffektiviteten.

Sentrale hensyn til autoklavering
(Noen helautomatiserte importerte autoklaver krever kanskje ikke manuell ventilasjon)

Når du bruker en autoklav, er det viktig å fjerne kald luft fra kammeret mens du introduserer damp. Eksosventilen skal forbli åpen til all kald luft blir utvist, noe som sikrer en jevn temperaturfordeling inne.

Hvis det forblir luft inne i kammeret, kan trykkmåleren indikere riktig trykk, men den faktiske temperaturen vil være lavere enn forventet. Jo mer gjenværende luft, desto større er avviket, noe som fører til ufullstendig sterilisering.

(For de som møter luftbobler i små rør når du steriliserer gjæringsbaserte medier, kan du prøve å øke luftvakuering for å forbedre resultatene.)